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【脉铂医药】MedBio|Firefly Luciferase mRNA|MED18759|技术资料

2021-12-13

1、mRNA基本资料:

Messenger RNA (mRNA)——信使核糖核酸携带遗传信息,在蛋白质合成时充当模板的RNA。信使RNA 从脱氧核糖核酸(DNA)转录合成的带有遗传信息的一类单链核糖核酸(RNA)。它在核糖体上作为蛋白质合成的模板,决定肽链的氨基酸排列顺序。mRNA存在于原核生物和真核生物的细胞质及真核细胞的某些细胞器(如线粒体和叶绿体)中。RNA病毒和RNA噬菌体中的 RNA既是遗传信息的载体又具有mRNA的功能。生物体mRNA种类的多少与生物进化水平有关,高等生物所含的遗传信息多,mRNA的种类也多。生物体内某种mRNA的含量根据需要而有不同,如5龄蚕后部丝腺体的主要任务是快速合成大量丝心蛋白,因而编码丝心蛋白的mRNA含量特别多。有些细菌需要不断适应外部环境,其体内编码某些诱导酶的mRNA的含量也较多。

2、mRNA优势:

(1)插入性突变的风险最小

可以转染非分裂细胞等较难转染的细胞

(2)短期表达且可控

可以精准瞬时地对表达进行调控,并且可以通过生理代谢途径完全讲解。

(3)高效的递送

mRNA针对的是细胞质,只需要穿过质膜即可。相比之下,质粒DNA和大多数类型的病毒载体必须到达细胞核,并穿过格外的膜屏障。

(4)快速的表达水平

转染后6-8小时即可检测到对应的表达,比DNA或者病毒基质的方法更快

3、mRNA转染的优点:

(1) 无需核吸收——蛋白直接在细胞质中表达

(2)其蛋白质表达比DNA转染更快

(3)以完全不依赖启动子的方式表达蛋白质

(4)没有基因组整合的风险

(5)非常适合转染生长缓慢或不分裂的细胞

(6)蛋白表达与mRNA的量直接相关

(7)瞬时转染:蛋白质的表达在有限的时间内持续,避免了与积累有关的毒性

4、 Firefly Luciferase mRNA基本资料及用途:

EZ Cap? Firefly Luciferase mRNA 进入细胞后会表达荧光素酶蛋白,该蛋白最初是从萤火虫 Photinus pyralis 中提取的。该酶催化 ATP 依赖性 D-荧光素氧化,并在约 560 nm 波长处产生化学发光。

萤火虫荧光素酶是一种常用的生物发光报告基因,用于基因调控和功能研究。适用于 mRNA 递送、翻译效率、细胞活力和体内成像等检测。EZ Cap? Firefly Luciferase mRNA 的浓度为 1mg/ml。

它由 EZ Cap? Reagent AG (3' OMe)共转录加帽,可高效生成 cap 1 结构。Cap 1 结构更适合哺乳动物系统,并且比 Cap 0 结构(ARCA 和 mCap)具有更高的转录效率。

EZ Cap? Reagent AG (3' OMe) 获得仅以正确方向插入的能力,导致形成的 mRNA 可以比使用 EZ Cap? Reagent AG 启动的那些高效翻译两次。聚 (A) 尾的添加增加了 mRNA 在体外和体内的稳定性和寿命。

Poly (A) tail 在提高翻译起始效率方面也起着重要作用。所有的修改都是为了模拟完全加工的成熟 mRNA。EZ Cap? Firefly Luciferase mRNA 是观察 mRNA 递送、翻译和其他行为的理想产品。

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